關鍵字：生物能氣功，流行性感冒病毒

緒論：

　本實驗即研究氣功外氣對A型流行性感冒病毒之影響。 在此實驗中我們請來六位氣功師來進行實驗，將待測之A ／Taiwan／HlNl流行性感冒病毒株置於氣功師前方20㎝處 ，由氣功師進行發功，作用30分鐘後，立即測病毒力價之 變化，並進行病毒斑點實驗及免疫螢光染色實驗，來觀察 受氣功外氣作用後之病毒力價是否受到影響。同時看狗腎 細胞株（MDCK）及人類早期白血球細胞株（HL-CZ）之增 殖作用是否受到此氣功之影響。

　由結果顯示，在病毒力價的改變方面，低力價（1：2） 之病毒在經六位氣功師之氣功外氣作用後，有五位氣功師 能使病毒之力價下降至1：1，顯示有抑制作用；而高力價 （1：32）之病毒在同樣經六位氣功師作用後僅有一位氣 功師之氣功外氣使病毒之力價下降至1：16，由此可見， 高力價之病毒較不易受到作用。而受過氣功外氣作用後之 病毒在MDCK、HL-CZ細胞中增殖的情形，經由病毒斑點實 驗及免疫螢光染色亦發現有五位氣功師所發之氣功外氣對 病毒於MDCK細胞中之增殖有抑制作用。

材料與方法：

(2)病毒力價之測定：將病毒做二倍連續稀釋於96穴V型微量 滴定盤上，使一個穴含50λ，加入0.5％天竺鼠紅血球50λ 混合，並以磷酸鹽緩衝液（PBS）取代病毒液作陰性對照， 靜置一小時，觀察血球凝集之情形，並以最高稀釋倍數能 產生部份或完全紅血球凝集現象者，作為一個凝集單位 （HA unit），即力價之單位。

(3)病毒斑點形成法：將長滿75C㎡培養瓶之MDCK細胞以磷 酸鹽緩衝液洗二次，再以0.25％胰蛋白脢（trypsin）5㏄ 浸泡至細胞變圓後除去，以5㏄10％EMEM（Eagle's minimum essential medium）【其中含有10％的胎牛血清（FCS,GIBCO ），100u/ml青黴素（penicillin），100μg/ml鏈黴素（ streptomicin），2mM麩氨酸（L-glutamine）以及1μM非 必需氨基酸】培養基沖打細胞，並調成每ml中有7×10● 個細胞，將細胞種至六個穴之培養盤，每個穴3㏄，在 37℃、5％二氧化碳培養箱中培養二天後，以磷酸鹽緩衝 液洗二次後，每個穴加入0.9㏄之2％EMEM培養基（含 trypsin30μg/ml）置於培養箱中一小時，再於每個穴中 加入0.1ml以磷酸鹽緩衝液作十倍連續稀釋之病毒液，置 於37℃、5％二氧化碳培養箱中一小時，且每15分鐘搖一 次，一小時後以磷酸鹽緩衝液洗二次，於每個穴中加入 4ml由2×之2％MEM培養基配成終濃度為0.8％洋菜膠（ agarose），置於培養基六天，以福馬林（40％ formaldehyde） 在室溫固定一天後，取走洋菜膠，以結晶紫（crystal violet） 染液染色，觀察病毒斑點之形成情形。

(4)A型流行性感冒病毒感染HL-CZ細胞：將HL-CZ細胞以細 胞刮杓刮下後以離心（100g，4℃，10分鐘）方式收集， 並以不含血清（serum free）之PRMI-1640培養基將濃度 調成每1ml有5×10●個細胞，在加入病毒液0.1ml後置於 37℃、5％二氧化碳培養箱中一小時，其間每15分鐘搖一 次，使病毒均勻吸附，一小時後以不含血清之PRMI-1640 培養基洗三次，最後加入PRMI-1640培養基置於37℃、5％ 二氧化碳培養箱中培養。

(5)免疫螢光染色：受A型流行性感冒病毒感染後之HL-CZ 細胞，以刮杓刮下，離心（1000rpm，10分鐘），倒掉上 清液，再加入磷酸鹽溶液（PBS）製成細胞懸浮液後再離 心（1000rpm，10分鐘），如此重覆二次，再以磷酸鹽溶 液製成5×10●／ml之細胞懸浮液，取15ml滴在8個穴之玻 片上，空氣乾燥，再以4℃丙酮溶液固定10分鐘，空氣乾 燥後，加入已被FITC-conjugate之A型流行性感冒病毒核 蛋白式血球凝集素之抗體，置於濕的盒子中後，再置於 37℃作用45分鐘，然後以pH7.6磷酸鹽溶液浸泡5分鐘二 次，再以蒸餾水浸泡5分鐘，空氣乾燥後，以丙三醇 （glycerol）封蓋，用螢光顯微鏡來觀察細胞受病毒感 染之情形。

結果：

　將受過氣功外氣作用後之病毒液（力價1：32），再以 不同稀釋度稀釋後，種入MDCK細胞，進行病毒斑點形成試 驗，其結果如圖一所示，六位氣功師中有五位（A，B，C， D，E）受氣功外氣作用後之病毒液，在病毒斑點形成試驗 中發現其所造成之細胞退化並不明顯，斑點之產生較少且 小，如圖1-a。而有一位氣功師(F)所發氣功外氣作用後之 病毒液所進行之病毒斑點形成試驗則造成細胞退化明顯， 有較大而明顯之斑點形成，如圖1-b。病毒控制組如圖1-c 與圖1-b相似，而細胞控制組如圖1-d。由這些結果顯示， 有五個氣功師所發之氣功外氣能有效抑制A型流行性感冒 病毒在MDCK中之增殖作用。

　受過氣功外氣作用後之A型流行性感冒病毒液，再種入 人類早期單核細胞株HL-CZ中，以免疫螢光染色之方法， 觀察細胞內病毒抗原表現之情形，結果如表四。由表中之 結果可得知有四位氣功師（A，B，C，D）所發之氣功外氣 能有效抑制A型流行性感冒病毒之早期複製，而有二位氣 功師（E，F）則無此現象。此結果與病毒斑點形成試驗中 所得之結果大致相同，顯示A，B，C，D四位氣功師所發之 氣功外氣能有效抑制A型流行性感冒病毒在MDCK、HL-CZ中 之增殖作用。此外，氣功外氣對HL-CZ少數的細胞中反錄 病毒沒有什麼影響。

討論：

　在病毒斑點實驗中，有五位氣功師所發之氣功外氣能有 效抑制高力價病毒並使其在MDCK細胞中之增殖能力改變， 而免疫螢光染色反應所測得受氣功外氣作用後之病毒，其 中有四位氣功師能抑制在HL-CZ細胞中病毒的增殖。結果 顯示，較強的氣功外氣確實有抑制A型流行性感冒病毒在 細胞中之增殖作用。然而其抑制作用機制為何，有待進一 步研究。此外，我們針對B、F氣功師所發過功之A型流行 性感冒病毒液，種回HL-CZ細胞中，以免疫螢光抗體染色 之方法來估計HL-CZ細胞受病毒感染的情形，如表五所列 。由結果我們發現B氣氣功師所發之氣功外氣對病毒感染 初期（感染後一天）之增殖作用好像並沒有影響，但是後 期（感染後三天）病毒繁殖能力卻有下降的趨勢【均以病 毒控制組來作比較】，而F氣功師對病毒感染初期（感染 後一天）之增殖有抑制作用，而對後期（感染後三天）之 病毒增殖卻有增進作用。此結果頗值得再加以探討，因為 如果氣功外氣影響病毒對初期感染與後期感染的狀況不同 ，顯示氣功外氣可能影響病毒在細胞中的複製機制。